苏州方舟基因药业有限公司
 
   

 

《诱导多能干细胞库的建立及其在血液病治疗方面的应用

研究》项目后期自查及实验讨论会议纪要

    课题负责人:戴卫
    分课题负责人(天津):程涛; 分课题负责人(苏州): 蒋永平
    与会专家:马钰波,丁欣欣,张庆宇,刘日河
    课题实施日期:2011年1月1日至2013年12月31日

    首先,蒋永平博士代表分课题承担单位苏州方舟基因药业有限公司对课题进展情况对国家重大专项办公室有关负责人做了总结汇报:

    一、 课题考核指标:

    用于规模化制备诱导性多能干细胞(iPS)的小分子和SALL4等细胞因子基因工程药物开发及其应用研究,并以这些小分子和细胞因子基因工程药物为基础,进行各种干细胞的扩增。基于ips在致瘤等方面的风险,越来越多的科学家和临床医生开始质疑这一治疗途径,目前国际上对ips的研究趋于保守。针对这种情况,在保持原研究目标不变的情况下,我们及时对研究实施方案进行了调整,以人类脐带血经过扩增因子药物作用扩增和定向分化后作为细胞载体治疗或移植治疗方法,进行血友病和其他血液系统疾病的1-2个临床前研究,包括以下三个方面:

    1, 相关小分子药物或SALL4等重组干细胞扩增因子药物的筛选,并测试其对干细胞扩增的作用;

    2, 运用血友病人的iPS细胞经基因插入纠正该病的遗传缺陷体外研究;

    3, 进行动物基因治疗血友病的前期研究,利用人脐带组织来源血管内皮细胞移植对小鼠血友病模型的疾病逆转研究等。

    二、考核指标已完成任务情况:

    1,对照考核指标1,2完成情况

    近期完成了包括基础培养基配方和优化的细胞生长因子组合配方的研发,并对人源脐带血造血干细胞、人动员外周血造血干细胞、人骨髓造血干细胞、猴骨髓造血干细胞和猴动员外周血造血干细胞等进行了体外培养扩增, 以验证其高效扩增的有效性和安全性。以人脐带血造血干细胞为例,体外培养9天可以实现干细胞增长40倍左右,总有核细胞扩增180倍左右;体外培养16天时, CD34+造血干细胞可增长60左右,总有核细胞扩增可达1800倍左右。为干细胞移植治疗和条件性诱导分化成功能细胞用于输注治疗奠定了基础。除此之外,我们还筛选中药提取物中可促进干细胞扩增的有效成分, 目前已经对包括人参皂甙、川穹提取物等20多种粗提物开展了筛选工作。 开展了p450细胞色素氧化酶家族基因在干细胞增殖和分化过程中的研究, 以及转录因子Sall4B对干细胞的扩增效果。b,同时,我们还利用lenti-sall4b-viral转染了食蟹猴骨髓来源造血干细胞,在扩增12天可以使CD34+细胞扩增5倍以上, 总有核细胞扩增15倍左右, 与人骨髓来源造血干细胞的体外扩增倍数相当。另外,考虑到慢病毒转染可能带来的生物安全性问题, 我们同时进行了在昆虫细胞中的TAT-Sall4B蛋白纯化,复性,以期能够安全、高效的体外扩增干细胞。

    2、对照考核指标3完成情况

    (1) 人脐带组织来源血管内皮细胞移植对小鼠血友病模型的疾病逆转研究:

    通过移植人脐带组织来源的血管内皮细胞对无胸腺小鼠肝窦内皮损伤进行重建,为进一步研究人源内皮细胞对小鼠血友病的疾病逆转奠定基础。该实验正在进行中,估计十一月中旬将完成,并进行实验结果数据的分析。

    (2) 猴动员外周血造血干细胞体外扩增后自体移植进行骨髓重建实验,该实验正在进行中,估计十二月中旬将完成,并进行实验结果数据的分析。

    随后程涛所长汇报了天津血研所过去两年多的时间中的课题进展状况。利用三例血友病A患者外周血单个核细胞进行逆向诱导成IPS细胞,经过对凝血因子VIII的外显子2,和外显子6的基因测序,发现第43位和第226位的精氨酸突变为丝氨酸。目前这三个细胞系已经分别提供3管给苏州团队,将进行进一步的基因纠正、定向诱导为血管内皮细胞并进行分泌凝血因子VIII的功能检测。

    最后,国家重大专项办公室有关负责人、项目承担单位负责人与会专家共同对项目进展情况进行了深入的讨论,并对项目具体的实验细节提出了若干宝贵建议。

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